香菇多糖对烟草花叶病毒的抑制作用研究

 时间:2020-08-08  贡献者:liangxingzhijia.com

导读:烟草花叶病毒的遗传物质是dna还是rna?,龙源期刊网 http://www.qikan.com.cn香菇多糖对烟草花叶病毒的抑制作用研究作者:罗琰 来源:《现代农业科技》2013 年第 24 期摘要 利用有机溶剂浸提法分离香菇多糖,研究了多糖对烟草

烟草花叶病毒的遗传物质是dna还是rna?
烟草花叶病毒的遗传物质是dna还是rna?

龙源期刊网 http://www.qikan.com.cn香菇多糖对烟草花叶病毒的抑制作用研究作者:罗琰 来源:《现代农业科技》2013 年第 24 期摘要 利用有机溶剂浸提法分离香菇多糖,研究了多糖对烟草花叶病毒(TMV)的体外钝 化以及对烟草抗性的诱导作用。

结果表明:体外钝化与多糖浓度呈正相关,当处理浓度为 5.00 mg/mL 时,枯斑抑制率为 48%。

用 1.00 mg/mL 多糖喷施烟草叶片可以产生较好的诱导抗性, 枯斑抑制率为 53%。

进一步研究表明,多糖诱导抗性与过氧化物酶(POD)和多酚氧化酶 (PPO)活性增加有关。

关键词 香菇多糖;烟草花叶病毒;抑制作用 中图分类号 S435.72;S481+.9 文献标识码 A 文章编号 1007-5739(2013)24-0147-01 烟草花叶病是农业生产中一类重要病害,对烟草花叶病的防治是植物病害防治研究的热点 与难点。

有报道指出毛头鬼伞多糖[1]、平菇多糖[2]和云芝多糖[3]等多种真菌多糖对烟草花叶 病毒(TMV)具有钝化和诱导抗性作用。

香菇多糖是从香菇子实体中提取的水溶性多糖,目 前该多糖的研究主要集中在其抗肿瘤、抗病毒和免疫调节功能上,对其抗植物病毒活性研究较 少[4]。

有研究显示香菇水浸液对 TMV 具有抑制作用[5]。

本文以香菇多糖处理心叶烟 (N.glutinosa)和普通烟(N.tabacum),研究其对 TMV 的抑制作用。

1 材料与方法 1.1 试验材料 TMV 毒源由本实验室保存;测定枯斑寄主为心叶烟(N. glutionosa),系统侵染寄主为普 通烟(N. tabacum var. K326)。

干香菇购于超市。

1.2 试验方法 1.2.1 香菇多糖分离纯化[6]。

三氯乙酸浸提法提取粗糖:10 g 香菇干粉,200 mL 三氯乙酸 (0.2 mol/L),4 ℃过夜。

滤液蒸发至 100 mL,加 1× 甲醇混匀,过夜。

离心取上清,加 2× 甲 醇,过夜,离心弃上清,干燥。

多糖纯化:粗糖水溶液(W/V=50∶1)加 1× CTAB 缓冲液 (0.15 mol/L),离心弃上清。

乙酸(2 mol/L)溶解沉淀,离心取上清,加 1× 甲醇,过夜。

离 心,甲醇漂洗沉淀,冻干。

1.2.2 多糖对 TMV 的钝化作用。

多糖稀释液(0.25、0.50、1.00、5.00 mg/mL)和等体积的 TMV 提取液混匀后,半叶法接种到心叶烟上[2],3 d 后统计枯斑数。

计算枯斑抑制率,计算公 式如下:

龙源期刊网 http://www.qikan.com.cn枯斑抑制率(%)=■×100 1.2.3 多糖诱导烟草抗性。

选取八至十叶期的烟草幼苗,喷不同浓度多糖稀释液(0.25、 0.50、1.00、5.00 mg/mL),对照组喷清水。

5、6 和 7 位叶片表面喷处理液。

4 d 后选择 2、3 和 4 位叶片进行 TMV 摩擦接种。

接种 6 d 后统计枯斑数量,计算枯斑抑制率。

1.2.4 酶活力测定。

选择八至十叶期烟草幼苗,喷施 1 mg/mL 多糖稀释液,对照组为清 水。

诱导后第 0、1、2、3、4、5、6、7 天取同一叶位叶片测定其 POD 和 PPO 活性。

测定方 法参考赵世杰等的方法[7]。

2 结果与分析 2.1 多糖对 TMV 的钝化作用 多糖稀释液对 TMV 均有钝化作用。

如图 1 所示,多糖处理后的 TMV 接种烟草叶片产生 的枯斑量明显小于对照,当多糖浓度为 5.00 mg/mL 时,枯斑数目与对照之间表现出极大差 异,枯斑抑制率达 48%。

说明多糖对 TMV 具有钝化作用,而且钝化作用随着浓度升高而升 高。

2.2 多糖诱导处理对 TMV 抑制的影响 如图 2 所示,用 0.25、0.50、1.00、5.00 mg/mL 多糖诱导后,烟草均表现出 TMV 抗性, 枯斑抑制率分别为 23%、29%、53%和 39%。

其中稀释浓度为 1.00 mg/mL 时,对 TMV 的抗性 诱导效果最好。

2.3 多糖诱导对 POD 和 PPO 活性的影响 用 1.00 mg/mL 香菇多糖喷施烟草后,其叶片中 POD 和 PPO 活性变化趋势基本一致,呈先 上升再缓降的趋势。

如图 3 所示,诱导 3 d 后叶片中 POD 和 PPO 活性明显增高,第 5 天其活 性达到顶峰,为对照的 3.8 和 5.4 倍。

3 结论 从自然界分离新的抗病毒成分是植物病毒病防治工作的研究热点[8]。

本文研究了香菇多 糖对 TMV 的钝化作用,发现其钝化作用随处理浓度的升高而增强。

虽然高浓度处理可以取得 明显的抑制效果,但是低浓度下对 TMV 钝化作用不明显,因此该多糖不适于大范围病毒病的 治疗。

研究发现在 1.00 mg/mL 诱导浓度下香菇多糖对 TMV 的有明显诱导抗性。

POD 和 PPO 是 植物体内广泛存在防御酶类,酶活的改变与抗病能力密切相关,而香菇多糖喷施烟草能够诱导